Durchflusszytometrie

© Fraunhofer IME | Janina Kirchhoff
Schematische Übersicht der durchflusszytometrischen Analyse
© Fraunhofer IME | Janina Kirchhoff

Die Durchflusszytometrie bietet die simultane Analyse mehrerer physikalischer und chemischer Parameter von sphärischen biologischen Zellen bzw. Partikeln, unabhängig von ihrer Herkunft. Während die Proben mit einer sehr hohen Flussrate einen Laserstrahl passieren, können in parallelen Messungen mehrere charakteristische Parameter eines Partikels oder einer Zelle gleichzeitig analysiert werden und beispielsweise zur spezifischen Untersuchung von Populationen/Zelleigenschaften oder zur Selektion einzelner Zellen genutzt werden.

FACS (Fluoreszenz-aktivierte Zellsortierung) verbindet dabei die schnelle Analyse großer Zellzahlen im Hochdurchsatz von bis zu 200.000 Ereignissen pro Sekunde mit der physikalischen Trennung und Isolierung der gewünschten Zellpopulation oder individueller Einzelzellen bzw. Partikel.

Das Fraunhofer IME besitzt, neben der seit Jahren routinemäßig für Säugetierzellen eingesetzten FACS und durchflusszytometrischen-Analysen ebenfalls die Expertise zur Sortierung von mikrobiellen und Pflanzenzellen.

 

 

In seiner Serviceeinheit bietet das Fraunhofer IME gut geschultes Personal an modernsten Geräten in einem S2 zugelassenem Laborbereich. Zur technischen Ausstattung gehören für analytische Zwecke:

  • BD FACSverse – 3 Laser und 8 Fluoreszenzdetektoren mit  Universal-Loader und Absolutzellzahlbestimmung
  • 2x BD Calibur – 1 bzw. 2 Laser Systeme

sowie zwei Hochgeschwindigkeits-Zellsorter

  • BD Influx – 5 Laser und 13 Fluoreszenzdetektoren mit „small particle-Detektor“ in einer Sterilbank
  • BD FACSvantage SE-DiVa - 3 Laser und 8 Fluoreszenzdetektoren

Ausgewählte Publikationen#

Ostafe, R., Prodanovic, R., Nazor, J., Fischer, R., 2014. Ultra-High-Throughput Screening Method for the Directed Evolution of Glucose Oxidase. Chemistry & Biology 21, 414–421. http://doi.org/10.1016/j.chembiol.2014.01.010

Ostafe, R., Prodanovic, R., Commandeur, U., Fischer, R., 2013. Flow cytometry-based ultra-high-throughput screening assay for cellulase activity. Analytical Biochemistry 435, 93–98. http://doi.org/10.1016/j.ab.2012.10.043

Kirchhoff, J., Raven, N., Boes, A., Roberts, J.L., Russell, S., Treffenfeldt, W., Fischer, R., Schinkel, H., Schiermeyer, A., Schillberg, S., 2012. Monoclonal tobacco cell lines with enhanced recombinant protein yields can be generated from heterogeneous cell suspension cultures by flow sorting. Plant Biotechnol. J. 10, 936–944. http://doi.org/10.1111/j.1467-7652.2012.00722.x